黄色av一区二区三区,亚洲福利影院一区久久,免费国产精品久久久久久久,国产岛国欧美一区二区三区

銷售熱線

19126518388
  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當(dāng)前的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率受何因素影響?

    原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率受何因素影響?

    發(fā)布時間: 2022-01-05  點(diǎn)擊次數(shù): 1354次
       細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA、RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展,轉(zhuǎn)染技術(shù)已成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗(yàn)中,其應(yīng)用越來越廣泛。原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑可轉(zhuǎn)染極度難轉(zhuǎn)染的免疫細(xì)胞、懸浮細(xì)胞,如T細(xì)胞、NK細(xì)胞、人淋巴細(xì)胞、THP-1等;可高效率轉(zhuǎn)染siRNA到任何哺乳動物細(xì)胞。用于將DNA和siRNA轉(zhuǎn)染到真核細(xì)胞系和各種原代細(xì)胞中;轉(zhuǎn)染細(xì)胞后可10小時內(nèi)快速代謝的第三代新轉(zhuǎn)染試劑。
      原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率受以下因素影響:
      1.細(xì)胞培養(yǎng)物
      健康的細(xì)胞培養(yǎng)物是成功轉(zhuǎn)染的基礎(chǔ)。不同細(xì)胞有不同的培養(yǎng)基,血清和添加物。低的細(xì)胞代數(shù)能確保基因型不變。高的轉(zhuǎn)染效率需要一定的細(xì)胞密度,一般的轉(zhuǎn)染試劑都會有專門的說明。推薦在轉(zhuǎn)染前24小時分細(xì)胞,這將提供正常細(xì)胞代謝,增加對外源DNA攝入的可能。一定要避免細(xì)菌,支原體或真菌的污染。
      2.血清
      大多數(shù)培養(yǎng)基在使用前需要加血清。胎牛血清經(jīng)常用到,便宜一點(diǎn)的有馬或牛血清。通常的,血清是一種包含生長因子及其它輔助因子的不確切成分的添加物,對不同細(xì)胞的生長作用有很大的差別。血清質(zhì)量的變化直接影響轉(zhuǎn)染效率。因此在轉(zhuǎn)染前建議先測(轉(zhuǎn)右)試出對細(xì)胞生長良好的血清批號,轉(zhuǎn)染時用同一批號的血清,并同時做負(fù)對照以測試細(xì)胞生長是否正常。有些轉(zhuǎn)染技術(shù)如脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染在有血清存在情況下效率很低,因此在轉(zhuǎn)染前要除血清。但有些對此敏感的細(xì)胞如原代細(xì)胞會受到損傷,甚至死亡導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率極低。
      3.載體構(gòu)建
      轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建也影響轉(zhuǎn)染結(jié)果。病毒載體對特定宿主細(xì)胞感染效率較高,但不同病毒載體有其特定的宿主,有的還要求特定的細(xì)胞周期,如逆轉(zhuǎn)錄病毒需侵染分裂期的宿主細(xì)胞,此外還需考慮一些安全問題。除載體構(gòu)建外,載體的形態(tài)及大小對轉(zhuǎn)染效率也有不同的影響,如前面提到的超螺旋及線性DNA對瞬時和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的影響。如果基因產(chǎn)物對細(xì)胞有毒性作用,轉(zhuǎn)染也很難進(jìn)行,因此選擇組成或可調(diào)控,強(qiáng)度合適的啟動子也很重要,同時做空載體及其它基因的相同載體構(gòu)建的轉(zhuǎn)染正對照可排除毒性影響的干擾。
      4.DNA質(zhì)量
      DNA質(zhì)量對轉(zhuǎn)染效率影響非常大。一般的轉(zhuǎn)染技術(shù)基于電荷吸引原理,如果DNA不純,如帶少量的鹽離子、蛋白、代謝物污染都會顯著影響轉(zhuǎn)染復(fù)合物的有效形成及轉(zhuǎn)染的進(jìn)行。
      5.轉(zhuǎn)染技術(shù)
      轉(zhuǎn)染技術(shù)的選擇對轉(zhuǎn)染結(jié)果影響也很大,許多轉(zhuǎn)染方法需要優(yōu)化DNA與轉(zhuǎn)染試劑比例,細(xì)胞數(shù)量,培養(yǎng)及檢測時間等。
產(chǎn)品中心 Products
哈啊慢点不要了视频| 国产青青操骚货在线观看| 奇米一区二区三区视频在线观看| 大阴茎交于大阴户黄片视频| 老熟妇高潮一区二区高清视频| 久久精品一区二区三区免费看| 亚洲中文字幕在线无码一区二区| 欧美真人性爱视频| 日逼动态视频免费看| 女女同性女同1区二区三| 大鸡巴操逼视频免费| 欧美一区二区三区刘玥| 亚洲国产综合精品 在线 一区| 老狼精品卡1卡2卡3网| 看看美日韩操逼吧| 最新日本一区二区三区免费看| 亚洲综合无码一区二区丶| 午夜场射精嗯嗯啊啊视频| 日本高清一区二区三区不卡| 欧洲老妇人操大逼| 美女张开腿让男人桶91| 精华欧美一区二区久久久| 欧美高清在线观看一区二区三区| 美女扒开腿让男人桶爽揉| 日韩午夜免费av在线| 五月天婷婷一区二区三区久久| 99爱国产精品免费视频| 国产精品自在自线。| 视频在线观看一区@99| 欧美人人做人人爽人人喊| 神马我不卡手机在线观看| 色狠狠久久av北条麻妃| 91成人精品国语自产拍| 日韩高清精品一区有码在线| 精品人妻一区二区三区日产乱码| 18岁美女破处在线观看| 亚洲另类激情在线观看| 日本十八禁大骚逼| 亚洲精品国产综合一线久久| 大鸡巴射在穴穴里的视频| 大鸡巴插入阴道视频|